Диагностикум клещевого энцефалита для РТГА, РСК, РРГ

Функциональное назначение

Применяется в клинической микробиологии, эпидемиологических исследованиях, производстве иммунобиологических препаратов. Специфическим компонентом набора является диагностикум КЭ, который способен выявлять антитела к вирусу клещевого энцефалита в сыворотках крови (плазме, асцитной жидкости) людей и животных в РТГА, в РСК, в РРГ. Для анализа пригодны пробы сывороток или плазмы крови с добавлением цитрата, гепарина, ЭДТА.

Принцип РТГА: диагностикум КЭ (антиген вируса клещевого энцефалита) способен вызывать агглютинацию взвеси гусиных эритроцитов в зоне слабокислых значений pH. В присутствии сыворотки, содержащей антитела к вирусу клещевого энцефалита, агглю­тинация тормозится (подавляется), благодаря блокировке ответственного за этот феномен антигена - гемагглютинина (ГА), обычно располагающегося на поверхности вириона.

Принцип РСК: комплекс антиген-антитело обладает способностью связывать комплемент. В реакции участвуют две системы антиген+антитело: специфическая - (диагностикум КЭ + сыворотка крови людей или животных) и индикаторная - (эритроциты барана + гемолизин). При взаимодействии вирусных антигенов с антителами (на первом этапе реакции) с комплексом антиген-антитело связывается комплемент, и он уже не может быть использован для лизиса эритроцитов (которые в смеси с гемолизином добавляют на втором этапе реакции). Таким образом, отсутствие лизиса эритроцитов говорит о положительном результате реакции (наличии антител к вирусу клещевого энцефалита в исследуемом образце).

Принцип РРГ: при взаимодействии с антителами сенсибилизированных вирусным антигеном эритроцитов барана в присутствии комплемента происходит реакция лизиса эритроцитов. Суспензию бараньих эритроцитов обрабатывают диагностикумом КЭ, отмывают и вносят в расплавленный агарозный гель, одновременно добавляя туда комплемент. После перемешивания гель тонким слоем наливают на стеклянную пластину и после затвердения вырезают в нем лунки диаметром 2 мм. В лунки наливают по 5 мкл исследуемой сыворотки (предварительно прогретой для удаления содержащегося в них комплемента). Диффундируя через гель, антитела образуют комплекс с антигеном и комплементом на поверхности эритроцитов, следствием чего является лизис. Вокруг лунок образуется прозрачная зона гемолиза, диаметр которой прямо пропорционален концен­трации специфических антител.

Технические характеристики

Состав набора:
1. Диагностикум клещевого энцефалита (диагностикум КЭ) - антиген вируса клещевого энцефалита, полученный из мозга белых мышей, инфицированных вирусом КЭ, методом боратно-солевой экстракции, очищенный протаминсульфатом или фреоном-113, инактивированный бетапропиолактоном, лиофилизованный — аморфный порошок кремового цвета, после растворения - прозрачная жидкость светло-желтого цвета, выпускаемый в комплекте с реагентами для постановки РТГА, РСК и РРГ. Титр специфических гемагглютининов не ниже чем 1:160, комплементсвязывающих антигенов - не ниже чем 1:32 — 10 ампул по 1 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 1 суток.
2. Положительный контрольный образец для РТГА (К+ РТГА) - асцитная жидкость крыс, иммунизированных живым вирусом КЭ (в виде 10% вируссодержащей суспензии мозга крысят-сосунков) с последующим введением в брюшную полость крыс клеток опухоли яичника крысы для индукции асцита, обработанная хлороформом, каолином и гусиными эритроцитами, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения — прозрачная жидкость от светло-желтого до светло-рубинового цвета. Титр антигемагглютинирующих антител - не ниже чем 1:160 — 2 ампулы по 1 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
3. Отрицательный контрольный образец для РТГА (К- РТГА) - асцитная жидкость неиммунизированных крыс, индуцированная путем введения клеток опухоли яичника крысы, обработанная хлороформом, каолином и гусиными эритроцитами, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения — прозрачная жидкость от светло-желтого до светло-рубинового цвета — 2 ампулы по 1 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
4. Положительный контрольный образец для РСК (К+ РСК) - асцитная жидкость крыс, иммунизированных живым вирусом КЭ, обработанная хлороформом, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения — прозрачная жидкость от желтого до рубинового цвета. Титр комплементсвязывающих антител не ниже чем 1:32 — 2 ампулы по 0,5 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
5. Отрицательный контрольный образец для РСК (К- РСК) - асцитная жидкость неиммунизированных крыс, обработанная хлороформом, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения - прозрачная жидкость от желтого до рубинового цвета — 2 ампулы по 0,5 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
6. Смесь солей для приготовления боратного буферного раствора (ББР) pH 9,00±0,05 — таблетка белого цвета массой 1,05+0,02 г, в состав которой входят: натрия хлорид - 0,7 г; кислота борная - 0,32 г; кальция стеарат или магния стеарат (наполнитель)
- 0,03 г. 1 таблетка рассчитана для получения 100 мл раствора ББР. По 1 таблетке в пакете из ПЭ пленки — 3 пакета.
Хранение рабочего раствора: не более 2 недель при температуре от 2 до 8 °С. 4 % раствор натрия гидроксида хранят при температуре 20-25 °С в пластиковом флаконе не более 14 суток, в стеклянном флаконе - не более 7 суток.
7. Смесь солей для приготовления фосфатного буферного раствора (ФБР) pH 6,20+0,05 — таблетки белого цвета общей массой 4,12+0,08 г, в состав которых входят: натрия хлорид - 0,88 г; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 1,06 г; натрий фосфорнокислый однозамещенный двуводный - 2,06 г; кальция стеарат или магния стеарат - 0,12 г. 1 таблетка рассчитана для получения 100 мл раствора ФБР. По 4 таблетки в пакете из ПЭ пленки — 2 пакета.
Хранение рабочего раствора: не более 2 недель при температуре от 2 до 8 °С.
8. Смесь солей для приготовления раствора Альсевера или Гепарин, раствор для внутривенного и подкожного введения 5000 МЕ/мл (ФСП 42-0504-7813-06) — 1 ампула (1 мл).
Смесь солей для приготовления раствора Альсевера - таблетки белого цвета общей массой 5,30+0,10 г, в состав которых входят: кислота лимонная моногидрат - 0,8 г; натрий лимоннокислый трехзамещенный моногидрат - 2,26 г; глюкоза - 2,2 г; кальция стеарат или магния стеарат - 0,04 г. 1 таблетка рассчитана для получения 100 мл раствора. По 5 (6) таблеток в пакете из ПЭ пленки — 1 пакет.
Хранение рабочего раствора: не более 2 недель при температуре от 2 до 8 °С.
9. Каолин (белая глина) по ГФ X, ст. 109 — 2 стакана по 30 г или 1 стакан по 60 г.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С в течение любого времени.
В коробку с набором вкладывают инструкцию по применению и нож или скарификатор ампульный. При упаковке ампул, имеющих кольцо излома или точку для вскрытия, нож ампульный или скарификатор ампульный не вкладывают.
Набор реагентов необходимо хранить при температуре от 2 до 8 °С.
Срок годности 3 года со дня изготовления. Набор реагентов с истекшим сроком год­ности использованию не подлежит.

Набор реагентов рассчитан на исследование 200 сывороток одновременно в трех тестах: РТГА, РСК, РРГ. Смеси солей для приготовления растворов и каолин, предназначенные для постановки РТГА, приложены в количестве, рассчитанном для исследования 200 или 350 сывороток при их предварительной обработке в объеме 100 мкл или 50 мкл соответственно.

Документация и инструкции